Molekulyar biologik tadqiqot usullari va ulardan foydalanish

Molekulyar biologik tadqiqot usullari , zamonaviy tibbiyot, sud-fan va biologiya muhim rol o'ynaydi. DNK va RNK o'rganishga yutuqlar, odam boshqalar kislotalar, aralashmasidan kerakli nuklein kislota tan aniqlash Qo'zg'atuvchining organizm genomunun kashf qodir

Molekulyar-biologik usullari. Bu nima?

Orqaga olimlar 70-80s yilda hal qilish uchun birinchi bo'lib inson genom. Ushbu tadbir genetik muhandislik va molekulyar biologiya rivojiga turtki bo'ldi. DNK va RNK xossalarini o`rganish u kasallik diagnostikasi, o'rganish geni maqsadida bu nuklein kislotalari foydalanish, endi mumkin degan ma'noni anglatadi.

DNK va RNK tayyorlash

Molekulyar biologik diagnostik usullari , ko'pincha, bu: boshlang'ich materiallar talab nuklein kislota. tirik organizmlarning hujayralarida bu moddalarning tanlash uchun bir necha yo'llari bor. Har bir o'z afzalliklari va kamchiliklari bor, va sof shaklda nuklein kislotalari izolyatsiya bir usuli tanlashda u hisobga olinishi kerak.

Marmur tomonidan DNK 1. tayyorlash. usuli, alkogol moddalar aralashmasini davolashda iborat sof DNK natijasida cho'kadi. Bu usulning salbiy o'yuvchi moddalar, fenol va xloroform foydalanish hisoblanadi.

bom haqida DNK 2. İzolasyonu. Bu yerda ishlatilgan asosiy modda - guanidine Tiyosiyanat (GuSCN) hisoblanadi. Bu cho'kma qilmoqda deoksiribonükleik kislotasi u keyinchalik maxsus bufer orqali to'planishi mumkin bo'lgan ixtisoslashgan substratlar, ustida. Biroq GuSCN - TCP inhibitörüne, va hatto kichik bir qismi nuklein kislotalar bilan ishlashda muhimdir polimeraz zanjir reaktsiyasi, albatta ta'sir qilishi mumkin DNK saqlash oladi.

aralashmalarning 3. yog'ingarchilik kutilmaydi. usuli o'zlari dehoksiribonukleinovoy kislota va iflosliklar saqlash uchun emas molekulalarida avvalgilaridan farq qiladi. Buning uchun, ion almashish foydalaning. ziyon emas, balki butun moddalar hal mumkin, deb hisoblanadi.

4. Ommaviy skrining. Agar DNK molekulasi tarkibida, va ba'zi statistik olish zarurligi haqida aniq ma'lumotga ega shart emas, bu usul hollarda ishlatiladi. sababi yuvish, ayniqsa Ishqorlar tashish paytida, nuklein kislota tuzilishi zarar etkazilishi mumkin, deb hisoblanadi.

tadqiqot usullari tasnifi

tadqiqot Barcha molekulyar-biologik usullari uchta asosiy guruhga bo'linadi:

(Fermentlar bir qancha yordamida) 1. mustahkamlash. diagnostika usullari ko'p muhim rol o'ynaydi polimeraz zanjir reaktsiyasini, - bu PCR o'z ichiga oladi.

2. Neamplifikatsionnye. usullari Ushbu guruh nuklein kislota aralashmalarni ish bilan bevosita bog'liq. Misollar joyida hibridizasyon, va hokazo, 3 turlari blotları bo'ladi

ma'lum bir DNK yoki RNK paytimda yopishib olgan, tekshirish molekulasi, uzatish tan asoslangan 3. usullari. Misol - gibridlangan tizimi Hybride Capture tizimi yechim (Hc2).

molekulyar biologik tadqiqotlar usullaridan foydalanish mumkin fermentlar

Ko'pchilik molekulyar diagnostik texnikasi fermentlar keng foydalanishni o'z ichiga oladi. Quyida eng tez-tez ishlatiladi:

1. chegara enzim - zarur buyumlar uchun DNK molekulasi "kesib".

2. DNK polimeraza - ikki torli deoksiribonükleik kislota molekulasi sintez.

3. teskari transkriptaz (kopyalamayla teskari) - Bir RNK andoza DNK sintezi uchun ishlatiladi.

4. DNK ligaz - nukleotidlarning o'rtasidagi fosfodiester obligatsiyalar shakllantirish uchun javobgar bo'ladi.

5. exonuclease - deoksiribonükleik kislota molekulasi so'nggi bo'limlari tomonidan nükleotidlerini olib tashlanadi.

PCR - DNK amplifıkasyonu asosiy usuli

Polimeraz zanjir reaktsiyasi (PCR) keng, zamonaviy molekulyar biologiya ishlatiladi. bitta DNK molekulasi nusxalari (kuchaytiradigan molekulasi) katta sonini olinishi mumkin bo'lgan, bu usul.

PCR asosiy vazifalari:

- kasalliklar tashxisi;

- gen DNK klonlash.

polimeraz zanjir reaktsiyasi quyidagi elementlarni o'z ichiga oladi amalga oshirish uchun: boshlang'ich DNK molekulasi, issiqlikka bardoshli DNK polimeraza (Taq yoki Pfu), deoksiribonükleotit fosfatlar (azot asoslaridan manbalari), astarlar (2 primer 1 DNK molekulasi) va o'zi olib kelishi mumkin bo'lgan bufer tizimi barcha reaktsiyalar.

denatürasyon, astar tavlandıktan va bo'shliqqa: PCR uch qadamda iborat.

1. denatürasyon. 94-95 daraja Selsiy proshodit haroratda DNK ikkita zanjir o'rtasidagi vodorod bog'lari sindirish, va natijada biz ikki bitta-torli molekulalarni olish.

2. tavlandı Primerler. 50-60 daraja haroratda santigrat-birini to'ldiruvchi turiga ko'ra bir nuklein kislota molekulalarining tarafida o'tish primerler sodir bo'ladi.

3. bo'shliqqa. 72 daraja haroratda ikki deoksiribonükleik kislota molekulalarining sintez qizi torli bo'ladi.

DNK ketma-ketliklar

Molekulyar biologik tadqiqot usullari ko'pincha deoksiribonükleik kislota molekulasi nükleotidlerden ketma bilim talab qiladi. aniqlash uchun genetik kodni tartiblangan. kelajak Molekulyar diagnostik inson ketma aniqlash olingan bilimlarga asoslangan bo'ladi.

Tartib quyidagi turlari:

• Maksam-Gilbert tomonidan ketma-ketliklar;
• Sanger tartibida;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe tartibida.